Imunológia

Imunologické laboratórium zaznamenalo od svojho vzniku v roku 2006 výrazný rozvoj v palete poskytovaných vyšetrení, ako aj v počte vyšetrených vzoriek. Denne vyšetríme v našich imunologických laboratóriách približne 800 – 1000 pacientov.

Naše imunologické laboratóriá poskytujú komplexnú laboratórnu diagnostiku imunopatologických ochorení, ako sú primárne a sekundárne imunodeficiencie, autoimunitné ochorenia, diagnostika alergií, ale aj imunofenotypizácia onkohematologických ochorení. 

Pred viac ako 10 rokmi sme sa ako jedna z mála spoločností začali zaoberať problematikou reprodukčnej imunológie. Zameriavame sa na komplexnú diagnostiku imunologických príčin porúch plodnosti u žien, ale aj mužov. V Košiciach, vďaka spolupráci s Centrom pre asistovanú reprodukciu Gyncare, robíme aj vyšetrenie postkoitálny test. Problematika imunologických príčin porúch plodnosti je veľmi komplexná a náročná. Preto je nevyhnutná spolupráca s lekármi – imunológmi, ktorí sa touto problematikou zaoberajú a riešia pacientov takpovediac „od začiatku do konca“.

Diagnostika primárnych a sekundárnych imunodeficiencií je komplexný proces. V rámci testovania bunkovej imunity sa v našich laboratóriách zameriavame nielen na základnú imunofenotypizáciu. Vyšetrujeme aj veľké množstvo aktivačných markerov, kostimulačných molekúl, imunofenotypizáciu subpopulácií B lymfocytov pre diagnostiku CVID a naše košické pracovisko je zamerané na imunofenotypizáciu onkohematologických ochorení. Imunofenotypovo abnormálne populácie sú prítomné u mnohých hematologických malignít zahŕňajúcich lymfómy, akútne a chronické leukémie, neoplázie z plazmatických buniek, myelodysplastické syndrómy a myeloproliferatívne ochorenia. Jedinečná kombinácia diferenciačných antigénov (CD markerov), ktorou bunky disponujú, definuje štádium ich diferenciácie, maturácie a líniovú špecificitu normálnych, ako aj patologických hematopoetických buniek. Imunofenotypová analýza umožňuje diagnózu, klasifikáciu, staging a monitorovanie hematologických neoplázií na základe identifikácie fenotypových aberácií. K diagnostike imunodeficiencií patria, samozrejme, aj podtriedy imunoglobulínov, stanovenie funkčnosti komplementu a postvakcinačné protilátky.  

V rámci vyšetrenia autoimunitných ochorení ponúkame kvalitatívny a kvantitatívny dôkaz širokého spektra orgánovo špecifických a nešpecifických autoprotilátok metódami nepriamej imunofluorescencie a ELISA so zameraním na oblasť reumatológie, nefrológie, autoimunity, hepatopatie a atrofickej gastritídy, neuronálnych ochorení. Ako jedno z mála laboratórií sa venujeme tiež diagnostike antifosfolipidového syndrómu s postupne sa rozširujúcou paletou protilátok. Prepojením imunológie a genetiky vznikli nové laboratórne techniky v imunológii, napr. stanovenie HLA antigénov na biočipoch. Naše laboratórium na základe tejto metodiky dokáže stanoviť genetickú predispozíciu pre niektoré autoimunitné ochorenia, ako napr. celiakia, psoriáza či Bechterova choroba.

Obrázky: hodnotenie autoprotilátok metódov nepriamej imunofluorescencie pod fluorescenčným mikroskopom.

K diagnostike alergických ochorení pristupujeme tiež veľmi komplexne a ponúkame viaceré typy vyšetrení. Základ tvorí, samozrejme, vyšetrenie špecifických IgE protilátok proti širokému spektru potravinových, inhalačných a liekových alergénov. Spolu s rozvojom „komponentovej diagnostiky“ neustále rozširujeme aj paletu šp. IgE proti komponentom, ktoré vyšetrujeme, podobne ako väčšinu ostatných šp. IgE. V rámci komponentovej diagnostiky ponúkame aj vyšetrenie šp. IgE biočipom.

Špecialitou nášho laboratória je diagnostika alergických ochorení, najmä liekových alergií, funkčnými testami bazofilov – CAST ELISA a bazofiloaktivačný test, ktoré vykonávame ako jedni z mála na Slovensku.

Zaujímavosťou nášho laboratória je aj diagnostika latentnej tuberkulózy, teda tzv. IGRA (interferon gamma release assay), keďže realizujeme obidva dostupné testy, teda Quantiferon TB-Gold aj T-SPOT.TB.

Komplexná diagnostika nie je možná bez kvalitného prístrojového vybavenia a bez kvalifikovaných ľudí.

Spolu na všetkých pracoviskách disponujeme 7 prietokovými cytometrami. Ako prví na Slovensku využívame špičkový 13-farebný 3-laserový DxFLEX prietokový cytometer, jediný s takýmito parametrami, určený pre klinické laboratóriá s IVD certifikátom. 

K dispozícii máme automaty na ELISA metódy, ako aj automaty na autoimunitné sklíčka. Najnovším prírastkom je vysokokapacitný Workstation, ktorý dokáže naraz vyšetriť 20 ELISA platničiek, teda cca 1800 testov pre 800 pacientov. Samozrejmosťou však zostáva, že je možné urobiť všetky testy z jednej skúmavky.

Laboratórium reprodukčnej imunológie

V laboratóriu reprodukčnej imunológie sa snažíme o komplexný pohľad na problematiku imunologických príčin porúch reprodukcie, pričom vychádzame z metodického usmernenia ČSAKI „Návrh doporučení pro stanovení parametru protilátkové a buněčné imunity u žen a mužů s poruchami plodnosti“. Po imunologických príčinách plodnosti je potrebné pátrať po vylúčení iných možných etiologických faktorov, ku ktorým patria faktory anatomické, genetické, hormonálne (najmä hyperprolaktinémia či hyposekrécia pohlavných hormónov a gonadotropínov) a infekčné (zápaly v urogenitálnej oblasti). Po ich vylúčení je možné pristúpiť k imunologickému vyšetreniu, aj to len u určitých skupín pacientov.

Ide o nasledujúce skupiny:

  1. Páry, ktorým sa nepodarilo dosiahnuť otehotnenie po roku pravidelného nechráneného styku.
  2. Ženy s opakovanými spontánnymi potratmi (po 2 spontánnych potratoch bez rozdielu veku).
  3. Po neúspešných pokusoch niektorej z metód asistovanej reprodukcie (ak nedôjde k počatiu, ale takisto ak nedôjde k donoseniu životaschopného plodu) – indikácia po 2 neúspešných in vitro fertilizáciách (IVF).

V rámci reprodukčnej imunológie existuje veľké množstvo vyšetrovacích metód a postupov. Výber konkrétnych zostáva na voľbe lekára v závislosti od špecifických potrieb pacienta, resp. páru.

V našom laboratóriu ponúkame metódy, ktoré sú odporúčané vo vyššie spomínanom „Návrhu doporučení pro stanovení parametru protilátkové a buněčné imunity u žen a mužů s poruchami plodnosti“, ako aj niektoré iné parametre, u ktorých sa ukazuje, že majú v tejto problematike význam:

Ženy

  • Bunková imunita
  • Intracelulárne cytokíny
  • Skríning systémových autoimunitných ochorení
  • Skríning celiakie
  • Antifosfolipidový syndróm
  • Vitamín D
  • Protilátky proti spermiám, zona pellucida, ováriám

Muži

  • Kvalita ejakulátu (množstvo a vitalita spermií, prítomnosť leukocytov, prítomnosť intraakrozomálneho proteínu)
  • Protilátky proti spermiám (viazané) v ejakuláte
  • Protilátky proti spermiám v sére
  • Skríning systémových autoimunitných ochorení
  • Skríning celiakie
  • Vitamín D

Diagnostika alergií

V diagnostike alergických ochorení ponúkame vyšetrenie špecifických IgE protilátok proti širokému spektru potravinových, inhalačných, liekových a iných alergénov. Diagnostiku špecifických IgE sme rozšírili o diagnostiku alergénových komponentov, ktoré vyšetrujeme ako samostatné alergénové komponenty systémom ImmunoCAP, alebo formou biočipu. Pre rýchlu diagnostiku šp. IgE ponúkame kvantitatívne stanovenie 20 – 25 alergénov na stripoch.

Systémom ImmunoCAP, ktorý je zlatým štandardom v diagnostike alergických ochorení, vyšetrujeme aj ďalšie parametre, ktoré pomáhajú v diagnostike alergických ochorení, či už je to eozinofilný kationový proteín (ECP), tryptáza, alebo špecifické IgG4.

Stanovenie hladiny a funkcie diaminooxidázy pomáha potvrdiť histamínovú intoleranciu.


Funkčné testy bazofilov

Pred vyšetrením funkčných testov je nutné vysadiť pacientovi antialergickú liečbu min. na 48 hod. Pri funkčných testoch sledujeme aktiváciu bazofilov po stimulácii alergénom. Keďže ide o proces „imitujúci“ priebeh alergickej reakcie „in vivo“, často sa podarí vďaka tejto reakcii odhaliť alergickú reakciu aj pri negatívnom výsledku špecifických IgE protilátok.


CAST ELISA

Kvantitatívne stanovenie sulfidoleukotriénov, ktoré sú uvoľnené leukocytmi po alergénovej stimulácii bazofilov in vitro. Leukotrién LTC4 a jeho metabolity (LTD4 a LTE4) sú produkované rôznymi typmi buniek (mastocyty, bazofily, eozinofily amakrofágy), preto môže byť CAST testom dokázaná okrem IgE-mediovanej aj non-IgE mediovaná, ako aj pseudo-alergická reakcia.


Test aktivácie bazofilov (BASOTEST)

Stanovenie aktivačného markeru CD203c na povrchu bazofilov po alergénovej stimulácii in vitro. Antigén CD203c  sa objavuje na povrchu bazofilov de novo po ich aktivácii, test teda hodnotí percento aktivovaných bazofilov po alergénovej stimulácii.

Testom je možné diagnostikovať liekovú alergiu. Vyšetrujeme všetky formy liekov okrem masťových a olejových preparátov. K diagnostike liekovej alergie je potrebné dodať lieky.